[KSS17]

Метод газовой хроматографии – масс-спектрометрии при анализе золпидема и его метаболитов в биологических жидкостях для экспертных целей

Категория: Авторефераты диссертаций
Библиографическое описание:
Крылова Елена Анатольевна
Аннотация:
Крылова Е. А. Метод газовой хроматографии – масс-спектрометрии при анализе золпидема и его метаболитов в биологических жидкостях для экспертных целей / Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук, 14.00.02. - «Фармацевтическая химия, фармакогнозия». - Пермь, 2013. - 25 с.
В результате проведенных исследований изолированы и идентифицированы основные метаболиты золпидема в виде их производных с помощью методов ТФЭ и ГХ/МС. Подробно описаны их газохроматографические и масс-спектральные характеристики. Составлена схема метаболизма золпидема. Определены оптимальные условия ТФЭ золпидема совместно с его метаболитами из мочи с применением 3-х факторных 3-х уровневых планов Бокса-Бенкена. Разработаны методики количественного определения золпидема в цельной крови и моче. Данные методики были валидированы по показателям специфичности, предела обнаружения, предела количественного определения, линейности, аналитической области методики, правильности, прецизионности. Предложена схема химико-токсикологического анализа золпидема и его метаболитов в биологических жидкостях.
Актуальность работы.
Объектом исследований настоящей работы является снотворный препарат, золпидем (производное имидазопиридина), обладающий короткой продолжительностью действия и быстрым наступлением фармакологических эффектов. Золпидем облегчает засыпание перед сном, а также среди ночи у больных с интрасомническими расстройствами. Токсикологическое значение золпидем имеет, во-первых, в связи с широким применением, во-вторых, из-за доказанной способности вызывать явления привыкания и лекарственной зависимости (психической и физической) при длительном приеме (более 4 недель). При этом формируются благоприятные условия для немедицинского применения золпидема. Данный препарат не является наркотическим средством, но нередки случаи парентерального введения золпидема с целью получения эйфории (Benyamina A., 2007). В-третьих, способность золпидема снижать скорость психической и мышечной реакции делает несовместимым прием этого лекарства с управлением всех видов транспортных средств и работой с приборами и автоматами, требующих точности движений. Препарат не раз применялся для осуществления преступных действий против личности, при этом использовались такие его свойства как потенцированное фармакологическое действие при совместном приеме с алкоголем, а также быстрое наступление седации (Levine B., 1999; Maravelias C., 2009; Chèze M., 2010). В РФ золпидем является контролируемым лекарственным средством в целях уголовного законодательства: он внесен в Список сильнодействующих веществ, согласно Постановлению Правительства №964 от 29 декабря 2007 года.
Вследствие способности золпидема интенсивно метаболизироваться в организме человека, его обнаружение в моче может быть затруднительно, т.к. лишь 0,2-1,3 % нативного вещества выводится с мочой в неизменном виде (Hempel G., 1996). Поэтому идентификация его метаболитов в моче может стать необходимым условием для получения корректных результатов ХТА.
Для изучения метаболитов золпидема в настоящей работе применялся метод газовой хроматографии – масс-спектрометрии (ГХ/МС). Он обладает высокой чувствительностью по отношению к описываемым соединениям, обеспечивает их селективное детектирование и снабжает структурной информацией. На сегодняшний день газовыми хроматографами с масс-селективным детектированием оснащены многие судебно-химические и токсико-химические лаборатории на территории РФ, и они широко применяются для рутинных исследований. Поэтому получение новых масс-спектральных данных о метаболитах золпидема, разработка и внедрение новых методик анализа с применением метода ГХ/МС является весьма актуальной задачей.
Цель работы и основные задачи исследования
Целью настоящей работы явилось изучение биотрансформации золпидема в организме человека, разработка методики совместного изолирования золпидема и его метаболитов из биологических жидкостей при оптимальных условиях и последующее количественное определение золпидема в цельной крови и моче.
Реализация цели осуществлялась путем решения следующих задач:
1) Исследовать особенности метаболических превращений золпидема в организме человека путем идентификации его метаболитов с получением их различных производных, изучением масс-фрагментации, обобщением и описанием полученных газохроматографических и масс-спектральных характеристик.
2) Определить оптимальные условия экстракции золпидема и его метаболитов из мочи при совместном присутствии.
3) Разработать методики количественного определения золпидема в цельной крови и моче методом ГХ/МС.
4) Составить по совокупности данных схему ХТА золпидема, адаптированную к практической деятельности судебно-химических и химико-токсикологических лабораторий как для скрининговых исследований на лекарственные и наркотические вещества, так и в случаях направленного анализа на золпидем.
ВЫВОДЫ
1. Для извлечения золпидема и его метаболитов из биологических жидкостей применен метод ТФЭ, который позволил эффективно изолировать аналиты, значительно различающиеся по физико-химическим характеристикам.
2. На основе изучения характера масс-фрагментации полученных различных дериватов основных метаболитов золпидема (метильных, этильных, ацетильных, пентафторпропионильных и триметилсилильных) под действием электронного удара (70 эВ), обработаны и описаны их масс-спектральные характеристики, дополненные газохроматографическими данными. Полученные сведения суммированы и приведены в единую систему, что ранее не встречалось в отечественной и доступной зарубежной литературе.
3. Составлена схема метаболизма золпидема в организме человека.
4. Проведена в два этапа оптимизация процедур ТФЭ методом математического планирования эксперимента с применением 3-х факторного 3-х уровневого плана. Компьютерное моделирование Бокса-Бенкена позволило определить оптимальные значения варьировавшихся в исследовании факторов, а также оценить эффекты их взаимодействий при минимальной затрате времени и лабораторных ресурсов.
5. На основе полученных оптимизационных данных предложена методика для количественного определения золпидема в крови и моче методом ГХ/МС с применением в качестве внутреннего стандарта имипрамина гидрохлорида.
6. Установлены валидационные характеристики предложенных методик по показателям специфичность, предел обнаружения, предел количественного определения, линейность, аналитическая область методики, правильность, прецизионность (повторяемость и внутрилабораторная прецизионность), показано их соответствие требованиям валидации.
7. Доказано, что применение предложенных методик количественного определения золпидема в образцах цельной крови и мочи, позволяет с высокой степенью эффективности (близкой к 100%) проводить экстракцию данного вещества из биологических жидкостей.
8. Составлена схема определения золпидема, его метаболитов и продукта гидролиза в образцах цельной крови и мочи с применением ТФЭ и ГХ/МС. Она может быть применена в практике клинико-диагностических и судебно-химических лабораторий, имеющих соответствующее приборное оснащение.