[Гермиона]

На турели самплера есть доп. маркировка: L1, L2, L3 это номера Layer для сэндвича. Сейчас поищу мануал и поправлюсь, если соврал.

Да, действительно, там, где позиции 15 и 16 надписано сверху - L2 и L3. Перед сливной виалой.

Нельзя пренебрегать вводом. Как введете - то и получите. Ввод пробы в капиллярную колонку - отдельная наука. Мелочей-нет. И еще надо ясно представлять себе все процессы, происходящие в испарителе и в колонке на начальном этапе: холодное улавливание, эффект растворителя и пр. Читайте! http://www.anchem.ru/chromos/vegh.pdf

Благодарю, замечательное руководство. Будем исправляться.

[alexlp]

Да, действительно, там, где позиции 15 и 16 надписано сверху - L2 и L3. Перед сливной виалой.
Благодарю, замечательное руководство. Будем исправляться.

С нетерпением ждем результатов с хроматограммами. В качестве тестового вещества подойдут фенобарбитал, дифениламин и папаверин.

[Гермиона]

С нетерпением ждем результатов с хроматограммами. В качестве тестового вещества подойдут фенобарбитал, дифениламин и папаверин.

Уважаемый alexlp!
Выставила все настройки по Вашему образцу, виалки использовала без вставок, пробы - по 200 мкл.
Пока не стала менять температуру испарителя, она у нас 280, и оставила режим ввода сплитлесс. Лайнер тоже пока стоит прежний, просто прибор пару дней еще будет "сильно занят".
И появились, наконец, на наших хроматограммах пики (УРА!). Все остальное буду пробовать и тестировать позже. Хроматограмму щелочного экстракта мочи прилагаю.
Огромное спасибо Вам за помощь!

Сообщение отредактировал Гермиона - 17.11.2013 - 15:17

[alexlp]

Пока не стала менять температуру испарителя, она у нас 280, и оставила режим ввода сплитлесс. Лайнер тоже пока стоит прежний, просто прибор пару дней еще "сильно занят".

Это ключевые моменты, уважаемая Гермиона!
Не пренебрегайте! Сменить лайнер на 7890 == 6 сек. Вы половину пробы теряете на вате и за счет неоптимальной геометрии.
Оставляя высокую температуру вы оставляете условия для образования артефактов типа -H2O и т.п. да еще имея дополнительные активные центры в вате!, а работая в сплитлесе вы теряете еще полпробы и получаете размытую начальную зону относительно пулседсплитлес режима.
Удачи!

Сообщение отредактировал alexlp - 17.11.2013 - 15:59

[Гермиона]

Это ключевые моменты, Гермиона!
Не пренебрегайте! Сменить лайнер на 7890 == 6 сек. Вы половину пробы теряете на вате и за счет неоптимальной геометрии.
Оставляя высокую температуру вы оставляете условия для образования артефактов типа -H2O и т.п. да еще имея дополнительные активные центры в вате!, а работая в сплитлесе вы теряете еще полпробы и получаете размытую начальную зону относительно пулседсплитлес режима.
Удачи!

ОК, иду на склад искать запасы лайнеров и выставляю температуру 250! Все-таки здорово, что хоть кто-то так подробно все объяснил! Дежурство в выходной день, пожалуй, это очень полезно. Еще раз огромное Вам спасибо.

[Korvet]

ставить лайнер без ваты не советую во первых без делителя (да еще и с импульсом давления) вся какашка идет прямиком в колонку, а так оседает на стекловате, а вот осевшая грязь после осмоления уже и дает эти эффекты о которых пишет alexlp. Просто без стекловолокна все то же самое будет происходить на колонке. что вам легче сделать: регулярно обновлять лайнер или подрезать колонку?

во вторых воспроизводимость перевода в газовую фазу на лайнере с ватой значительно выше. к примеру был у меня случай когда пользователи без ваты не смогли пройти поверку - не было воспроизводимости, пришлось пожертвовать свой лайнер с ваткой, все пошло ОК. просто менять их надо чаще. Но это все равно лучше чем менять колонку!

то же с температурой. что выдерживает 250, выдержит и 280, артефакты образуются целиком по вине активных центров. это я проверял.

[alexlp]

ставить лайнер без ваты не советую во первых без делителя (да еще и с импульсом давления) вся какашка идет прямиком в колонку, а так оседает на стекловате, а вот осевшая грязь после осмоления уже и дает эти эффекты о которых пишет alexlp. Просто без стекловолокна все то же самое будет происходить на колонке. что вам легче сделать: регулярно обновлять лайнер или подрезать колонку?

во вторых воспроизводимость перевода в газовую фазу на лайнере с ватой значительно выше. к примеру был у меня случай когда пользователи без ваты не смогли пройти поверку - не было воспроизводимости, пришлось пожертвовать свой лайнер с ваткой, все пошло ОК. просто менять их надо чаще. Но это все равно лучше чем менять колонку!

то же с температурой. что выдерживает 250, выдержит и 280, артефакты образуются целиком по вине активных центров. это я проверял.

Уважаемый Корвет!
Ваш подход вполне справедлив, когда вы имеете дело с вещдоками. Т.е. когда у вас 10 кг матрицы и 1 кг аналита. Переходим к нашим масштабам. В аликвоте мочи(2мл) имеем примерно 100 нг аналита. концентрируем это в 200 мкл растворителя теряя, в лучшем случае, 20%. получаем 80/200=400 пг во вводимом в колонку объеме.
Теперь перейдем к геометрии. Что произойдет с 1 мкл этанола, который испарится в верхней части лайнера с центральной перетяжкой заткнутого стекловатой в условиях скорости потока 1-2 мл/мин? Понятно, что верхний объем лайнера будет переполнен большая часть пробы будет выброшена назад.
Идеальных решений не бывает. Действительно, в режиме сплитлеса колонки долго не живут, особенно при использовании для пробоподготовки жидкость-жидкостной экстракции. Начальный метр колонки приходится сечь через 500-1000 вводов. Выход - предколонка, желательно из пустого деактивированного капилляра, лучше - чуть большего диаметра для большей поверхности, что даст более короткую зону конденсации растворителя. Можно, альтернативно, использовать куски старых колонок длиной 1-3 метра. Соединяются колонка с предколонкой через стеклянные деактивированные юнионы. Срок службы колонки при условии твердо-фазной экстракции и применения предколонок составляет 3000-4000 вводов. Состояние колонки контролируется по труднохроматографируемым веществам, например дифениламин, фенобарбитал, папаверин, индометацин. Хвостатость вплодь до полного исчезновения свидетельствует о необходимости смены колонки или предколонки. Не маловажную роль играет и дериватизация для срока службы колонки. Ведь дериватизируется не только то, что нас интересует, но и матрица, и в первую очередь ВЖК, которые в виде дериватов не столь сильно задерживаются в колонке. Эта проблема уже обсуждалась лет 5 назад. И еще. Производитель, т.е. Аджилент, не рекомендует применять стекловату для наших аналитов, равно как и специально выпускает лайнеры для сплитлесс ввода. На стр. 155 "The essential Chromatography Catalog from Agilent" You can read following: "Glass wool is generaly NOT recomended for the following analytes: ... pesticides, amines, DRUG of abuse..."

[Korvet]

на счет объема этанола при испарении, есть программка flowcalc, она должна быть у Вас, там все рассчитывается для разных типов лайнеров, температур и растворителей. не считал для "деленных пополам лайнеров", у меня их нет, для моих все нормально. но "биопробы" в этаноле все равно не вводить (там же дериваты как правило), я мыть иглу рекомендовал в нем.

я не знаю что там рекомендует Агилент, я знаю то что вижу сам. я слежу за состояние 5-ти гх-мс, три из них работают с биосредами, результаты с ватой не хуже, колонка живет дольше. просто при смене лайнера смотришь на эту вату, и мысленно переносишь это на колонку, и думаешь, "ну и хорошо что оно на вате осталось"...можно конечно предколонку но это очень хлопотно, да и площадь поверхности этой "деактивированной" до поры до времени поверхности примерно такая же выйдет как и у ватки...ну а поверхность старой б\у колонки...мне кажется на ней тоже будет много потерь, на то она и старая...

я кстати еще одну крамольную мысль выскажу, последнее время для биосред перешли на ввод с делением потока, 1\10, так результаты стали даже лучше...в том плане что чувсвительность не хуже, шума меньше, колонка живет дольше. Дело в том что делитель потока в ГХ действует селективно, то есть выдуваются главным образом легкие вещества, то что нас интересует, оно концентрируется, и на него делитель почти не действует...ну мне так кажется...

[alexlp]

результаты с ватой не хуже, колонка живет дольше.

А без ваты пробовали? А на уровне 15-20 нг/мл с ватой? Или оценка только на основании потоковых проб: что увидели?

я кстати еще одну крамольную мысль выскажу, последнее время для биосред перешли на ввод с делением потока, 1\10, так результаты стали даже лучше...в том плане что чувсвительность не хуже, шума меньше, колонка живет дольше. Дело в том что делитель потока в ГХ действует селективно, то есть выдуваются главным образом легкие вещества, то что нас интересует, оно концентрируется, и на него делитель почти не действует...ну мне так кажется...

Ну мысль не такая уж и крамольная. В былые годы, когда ни аджилентов, ни кристаллов не было, о сплитлесе читали только в книжках и расходы устанавливали пенниками приходилось работать как раз при таких делениях потока. Только давление на входе поднимали. На эффективности это не особо сказывалось, попадали на пологую ветвь кривой Ван-Деемтера, а вот качество ввода было хорошее. Но вот барбитураты при таком делении гонять - все замечательно, а вот ТГК-кислоту уже проблематично, другой порядок концентраций.
Нынешнее поколение супер-упер деактивированных лайнеров действительно позиционируется как сверхиннертное и подходящее для лекарств и наркотиков, но они нам доступны?
А вообще - у каждого свой вкус. Кто-то любит арбуз - а кто то и свинной хрящик

[Korvet]

так чтобы с одной пробой да в нескольких повторностях с ватой и без, так не пробовал, просто из практики сложилось такое впечатление. ну да и просто логично же предположить что если грязь не оседает в лайнере, то где она тогда оседает?а вот нужна ли она там?

пожалуй надо все же попробовать такой эксперимент....

[Sergei4]

Здравствуйте, извините если не по теме, но никому не приходилось сталкиваться с такой проблемой:
ALS Failure Code 245 Autoinjector front tower plunger error. Как от нее избавиться?

[alexlp]

Здравствуйте, извините если не по теме, но никому не приходилось сталкиваться с такой проблемой:
ALS Failure Code 245 Autoinjector front tower plunger error. Как от нее избавиться?

Опишите, в какой ситуации возникает ошибка?

[alexlp]

стр.163 мануала по автосамплеру:

Front (or Back) plunger error
• The syringe plunger is sticking or
not securely connected to the
plunger carrier.
• The plunger solenoid is binding.
• The plunger carrier encoder is
inoperable.

1 Remove the syringe and check it for
plunger stickiness or binding.
Replace the syringe if necessary.
For more information, see
“Inspecting a syringe” on page 102.
2 Check the viscosity of the sample
against the viscosity parameter.
Reset the viscosity parameter if
necessary.
3 Restart the sequence.
4 If the error occurs again, obtain
Agilent service.

[Sergei4]

Ошибка возникает при запуске последовательности на этапе промывки растворителем (Solvent A). При этом игла шприца остается во флаконе. Чисто случайно наше 1 выход из ситуации: включаю и выключаю сетевой концентратор, тогда все работает нормально... до запуска другой последовательности.

[alexlp]

Какой растворитель А? Пробовали без А? Шприц меняли?